RealPAGE TBE-PAGE核酸非變性電泳預制膠
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名稱
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規格
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RealPAGE TBE-PAGE核酸非變性電泳預制膠（12孔）
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10板/盒
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● 產品介紹：
RealPAGE TBE-PAGE核酸非變性電泳預制膠適用于20-2,000 bp雙鏈DNA或20-2,000 nt單鏈DNA的核酸電泳，適合用于 DNA電泳應用領域，包括分析限制性酶切、PCR產物、DNA印跡分析和引物分析。是一款安全、快捷、高性能的預制凝膠，即開即用無需自行配置各種試劑及灌膠操作，核酸條帶均一性好，分辨率高。兼容市場上主流的 mini 電泳槽， 如 Bio-Rad，天能，六一和君意東方等。
產品參數：
預制膠板尺寸：長10 cm，寬8.2 cm，厚度為4 mm
預制膠尺寸：長 8.2 cm，寬 7.2 cm，厚度為1.1 mm
梳孔：12 孔
包裝規格：10板/盒
最大上樣量：30 μl（12 孔）
● 產品貨號及選擇：
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貨號
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分離膠濃度
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孔數
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最大上樣量
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電泳緩沖液
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最佳分離范圍
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溴酚藍位置
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RTH5101-0005
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5%
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12
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30 μl
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1×TBE
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200-2000 bp
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~70 nt
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RTH5101-0010
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10%
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12
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30 μl
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1×TBE
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50-1500 bp
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~35 nt
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RTH5101-0015
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15%
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12
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30 μl
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1×TBE
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20-1000 bp
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~20 nt
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● 貯存、效期及運輸：
預制膠4-8℃貯存，切勿置于0oC以下冷凍；有效期30天；常溫運輸。
● 使用說明：
一. 樣品準備：
1.1 DNA樣品按照5：1體積加入6×非變性PAGE DNA上樣緩沖液（貨號：DL070），混勻后上樣。 建議每孔上樣0.2-0.5 μg左右即可。
1.2 TBE- PAGE非變性電泳雙鏈DNA Marker可以選擇10 bp DNA ladder（10-100 bp）（貨號：RTM443）或20 bp DNA ladder（20-500 bp）（貨號：RTM441）或25 bp DNA ladder（25-500bp）（貨號：RTM444）作為分子量標準；單鏈DNA Marker可以選擇單鏈DNA Marker（20-75 nt）非預混型（貨號：RTM507）或單鏈DNA Marker（10-75 nt）非預混型（貨號：RTM509）。
二. 電泳液的準備：
取 5×TBE（貨號：TB001），加入去離子水稀釋為1×，制備成1×TBE buffer或自行配制1×TBE。1×TBE電泳緩沖液配制方法：
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終濃度
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順序
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原料
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1升
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5 升
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89 mM
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1
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Tris堿 [MW121.14]
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10.8 克
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54克
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2 mM
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2
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EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]
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0.744 克
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3.72克
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89 MM
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3
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硼酸 [MW61.83]
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5.5 克
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27.5克
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4
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超純水最后定容至
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1 升
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5 升
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最后pH在8.2-8.3之間，可以不用調節pH，記錄每批pH
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三. 電泳：
3.1 將預制膠從包裝袋中取出，裝入兼容的電泳槽中，加入電泳緩沖液，再緩慢地將梳子拔出。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（如圖）。六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI，Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等電泳槽可以直接使用預制膠。不兼容Thermol系列電泳槽。
3.2內槽加滿電泳液，外槽加入電泳液沒過電泳槽底部的陽極即可，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次。
3.3 上樣：在梳孔內加入適當濃度和體積的樣品。建議每孔上樣0.2-0.5 μg左右即可。
注：最佳上樣量須通過實驗來確定，樣品過量較易導致條帶拖尾。
3.4 將電泳槽蓋子蓋好，并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔(紅對紅，黑對黑)。一般在150V電壓，電泳50-90分鐘，根據溴酚藍的位置大體判斷條帶大小位置，停止電泳。
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恒電壓
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起始電流
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結束電流
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電泳時間
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適用條件
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推薦電壓
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150V
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15-20 mA/板膠
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5-10 mA/板膠
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60+ min
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最佳電壓，最優的分辨率
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非變性膠濃度
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溴酚藍
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二甲苯菁
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5%
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~70 nt
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~250 nt
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10%
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~35 nt
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~120 nt
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15%
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~20 nt
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~75 nt
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3.5 取出玻璃膠板，稍加用力慢慢扳開或用刮板輕輕撬開玻璃膠板，將凝膠取出。
四. 染色：
使用核酸染料染色，RealSafe Red（貨號：GR002）或RealSafe All（貨號：GR004）核酸染料結合核酸效果最佳，強烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。
以下程序用RealSafe Red核酸染料(貨號:GR002)進行染色。
4.1 漂洗：拆下凝膠后，適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。
4.2 染色液配制：
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即用型RealSafe Red核酸染色液配制
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1×TBE
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RealSafe Red核酸染料
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10-20 μl
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4.3 染色：
凝膠浸泡于即用型染色液中，常溫避光搖床40-60 rpm 染色30 分鐘。
4.4 觀察：
紫外燈或藍光儀上觀察條帶。
遷移示意圖：
● 實驗示例：
