Hochest 33342活細胞染色液（100×）
Hoechst 33342 Staining
Solution for Live Cells(100×)
● 產品組成：
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貨號
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名稱
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規格
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HE1014S
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Hochest
33342活細胞染色液（100×）
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0.5
ml
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說明書
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一份
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● 產品簡介：
Hoechst 33342，也稱bisBenzimide
H 33342 或HOE 33342，分子式為C27H28N6O·3HCl
，分子量MW561.93，CAS:
23491-52-3，是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst
33342 專一性地與雙鏈DNA結合（優先結合AT），常用于細胞核染色。染色后可以用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342 的最大激發波長為346 nm（紫外激發），最大發射波長為460nm（藍色熒光）；Hoechst 33342 和雙鏈DNA 結合后，最大激發波長為350nm，最大發射波長為461nm。另外，由于Hoechst 33342專一性結合DNA，不與RNA結合，樣品無需使用RNase處理。與DAPI相比，Hoechst
33342具有更好的膜通透性，更適合于活細胞的染色。
Hoechst 33342和Hoechst
33258相比，Hoechst 33342對細胞的毒性作用更小一些，33258穿透能力較33342弱，染活細胞時容易被"泵出"，也就是拒染。所以一般來說Hoechst 33258用于細胞固定后再染色，而Hoechst33342則可以對活細胞直接進行染色。
本染色液為100×濃度，使用終濃度為1×，可直接用于活細胞或組織的細胞核染色，也可稀釋后用于固定細胞或組織的細胞核染色。
● 貯存：
-20℃避光保存，一年有效。
● 操作步驟：
一. 活細胞染色：
1.1 貼壁細胞：
1.1.1在培養液中均勻滴加適量的Hoechst 33342活細胞染色液(100×)至終濃度為1×，輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養的貼壁細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入10 μl Hoechst 33342活細胞染色液(100×)。培養液中的血清、酚紅等都不會對染色產生干擾。
1.1.2在適宜于細胞培養的溫度孵育10分鐘，可以直接在熒光顯微鏡下觀察。如果考慮到培養液對觀察效果的影響，進行以下操作步驟。
1.1.3吸除含染料的培養液，用PBS洗滌2-3次即可在熒光顯微鏡下觀察。
注：為避免凋亡細胞隨培養液或PBS被吸除，在吸除液體前，對于用多孔板中培養的細胞，最好用多孔板離心機離心一下以充分沉淀那些已經漂浮起來的凋亡細胞。細胞發生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。
1.2. 懸浮細胞：
1.2.1 在懸浮細胞培養液中加入適量的Hoechst 33342活細胞染色液(100×)至終濃度為1×，輕柔混勻。例如對于12孔板中培養的貼壁細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入10 μl Hoechst 33342活細胞染色液(100×)。培養液中的血清、酚紅等都不會對染色產生干擾。
1.2.2 在適宜于細胞培養的溫度孵育10分鐘，可以直接在熒光顯微鏡下觀察。如果考慮到培養液對觀察效果的影響，進行以下操作步驟。
1.2.3將細胞轉移到1.5 ml離心管中，500 g 離心5分鐘收集細胞。細胞沉淀用PBS洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。
1.2.4細胞沉淀中加入100-200 μl PBS，重懸沉淀。
1.2.6取5
μl抗熒光淬滅封片液于載玻片上，加入等體積步驟1.2.4染色后細胞重懸液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
1.2.6 熒光顯微鏡使用紫外激發，可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長350nm左右，發射波長460nm左右。
注：熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。
二. 實驗示例:
染色程序：
Jurkat細胞密度調整到1×106/ml，六孔板接種2 ml，加入10 μl STS（星孢菌素）至終濃度1 μM
37度培養3小時；加入20 μl Hochest 33342活細胞染色液（100×），RT避光染色15分鐘，熒光顯微鏡直接觀察。左圖為正常細胞（10×），右圖為STS誘導凋亡的細胞（10×）。
染色程序：
左為明場 20×相差；右為紫外激發
293細胞消化后調整密度為1×105/ml；12孔板，每孔接種1 ml，37度培養30小時；加入10 μl Hochest 33342活細胞染色液（100×）；37度培養10分鐘，直接觀察。